羥甲基戊二酰輔酶A合成酶（HMGCS）測試盒

微量法 100管/96樣

正式測定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

測定意義

羥甲基戊二酰輔酶A合成酶是甲羥戊酸代謝途徑中的關(guān)鍵酶，催化乙酰CoA與乙酰乙酰CoA生成羥甲基戊二酰CoA。

測定原理

HMGCS催化乙酰CoA與乙酰乙酰CoA生成羥甲基戊二酰CoA，同時(shí)產(chǎn)生CoASH，使DTNB轉(zhuǎn)化為黃色的TNB，在412nm下有特征吸光值。

所需的儀器和用品

可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制

提取液：100mL×1瓶，4℃保存；

試劑一：粉劑×1瓶，-20℃避光保存；臨用前加入3mL蒸餾水充分溶解待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融；

試劑二：粉劑×1瓶，-20℃避光保存；臨用前加入3mL蒸餾水充分溶解待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融；

試劑三：6mL×1瓶，4℃避光保存。

樣本測定的準(zhǔn)備

1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備：

細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

2、血清（漿）樣品：直接檢測。

測定步驟

1. 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至412nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 在微量石英比色皿或96孔板中加入25μL試劑一、25μL試劑二和50μL試劑三，混勻，加入100μL樣本上清，迅速混勻后記錄412nm下初始吸光值A(chǔ)1和4min后的吸光值A(chǔ)2。計(jì)算ΔA＝A2-A1。

HMGCS活性計(jì)算

用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式如下

1、血清（漿）活性

單位定義：每mL血清（漿）每分鐘催化產(chǎn)生1nmolTNB為一個(gè)酶活力單位。

HMGCS（nmol/min /mL）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣 ÷T=36.76×ΔA

2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞HMGCS活性

(1) 按樣本蛋白濃度計(jì)算

單位定義：每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1nmolTNB為一個(gè)酶活力單位。

HMGCS（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=36.76×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計(jì)算

單位定義：每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1nmolTNB為一個(gè)酶活力單位。

HMGCS（nmol/min /g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（W ×V樣÷V樣總）÷T=36.76×ΔA÷W

（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算

單位定義：每1萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生1nmolTNB為一個(gè)酶活力單位。

HMGCS（nmol/min /104 cel）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（500×V樣÷V樣總）÷T=0.074×ΔA

V反總：反應(yīng)體系總體積，2×10-4 L；ε：TNB摩爾消光系數(shù)，1.36×104 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.1 mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；T：反應(yīng)時(shí)間，4 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，500萬。

用96孔板測定的計(jì)算公式如下

1、血清（漿）活性

單位定義：每mL血清（漿）每分鐘催化產(chǎn)生1nmolTNB為一個(gè)酶活力單位。

HMGCS（nmol/min /mL）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣 ÷T=73.53×ΔA

2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞HMGCS活性

(1) 按樣本蛋白濃度計(jì)算

單位定義：每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1nmolTNB為一個(gè)酶活力單位。

HMGCS（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=73.53×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計(jì)算

單位定義：每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1nmolTNB為一個(gè)酶活力單位。

HMGCS（nmol/min /g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（W ×V樣÷V樣總）÷T=73.53×ΔA÷W

（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算

單位定義：每1萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生1nmolTNB為一個(gè)酶活力單位。

HMGCS（nmol/min /104 cel）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（500×V樣÷V樣總）÷T=0.147×ΔA

V反總：反應(yīng)體系總體積，2×10-4 L；ε：TNB摩爾消光系數(shù)，1.36×104 L / mol /cm；d：96孔板光徑，0.5cm；V樣：加入樣本體積，0.1 mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，4 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，500萬。

上海牧榮生物科技有限公司

1. 國內(nèi)試劑耗材經(jīng)銷代理。

2. 國外試劑的訂購?？商峁W美實(shí)驗(yàn)室品牌的采購方案。

3. 提供加急物流處理，進(jìn)口貨物，最快交期1-2周。

4. 進(jìn)出口貨物代理服務(wù)。

5. 公司代理眾多有名生命科學(xué)領(lǐng)域的研究試劑、儀器和實(shí)驗(yàn)室消耗品品牌：CELL DATA,Alamanda Polymers， cstti，Click Chemistry tools，Nanoprobes，Ancell，NANOCS，Ambeed, Inc，SPEED BioSystems, LLC，Tulip Biolabs, Inc，Torrey Pines Biolabs，magsphere ,FabGennix International ,paratechs，Medicago,Oraflow,CWE,Wasatch Photonics, alphananote, It4ip, proteoform, Caprico等,重點(diǎn)合作品牌 Lee Biosolutions,chematech,Nanopartz,denovix,Atto tec,macrocyclics等。

6. 質(zhì)量保證，所有產(chǎn)品都提供售后服務(wù)。付款方式靈活。公司堅(jiān)持“一站式"服務(wù)模式，為客戶全面解決實(shí)驗(yàn)、生產(chǎn)、開發(fā)需求。公司整合國際與國內(nèi)資源，加強(qiáng)網(wǎng)絡(luò)建設(shè)，提高公司內(nèi)部運(yùn)作效率，為客戶提供方便、快捷的服務(wù)。

7. 公司突出創(chuàng)新思維，提高工作效能，減低運(yùn)作成本，為客戶提供優(yōu)惠的價(jià)格。

羥甲基戊二酰輔酶A合成酶（HMGCS）測試盒